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浅谈柱层析硅胶的操作方法及注意事项
2019-11-21
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小编来给大家分享关于烟台脱色砂的相关知识啦,今天小编来给大家分享的是烟台脱色砂厂家浅谈柱层析硅胶的操作方法及注意事项


一.立柱安装


操作要点:装填前在塔底垫一层吸附棉,防止吸附剂泄漏。


有两种方法加载柱干法和湿法。


(1)干柱装填:硅胶通过漏斗装入柱内,中间不间断,形成滴流,缓慢加入管内。青岛层析硅胶厂家也可以用橡皮槌敲击柱子,使硅胶填充连续、均匀、致密。柱安装完毕后,打开下端活塞,注入洗脱液洗脱,排出柱内空气,保持一定的液位。


(2)柱湿载:将待用洗脱液装入柱内,打开下端活塞,使洗脱液缓慢流出。然后将硅胶缓慢、连续地倒入柱中(或将硅胶与适量洗脱液混合,形成悬浮液,缓慢地加入柱中)。硅胶在重力和洗脱液的作用下可以在柱中自由沉降。在此期间,流出的洗脱液应继续加入柱内,保持一定的液位,直到硅胶完全加入,柱内沉降不再发生变化。然后在硅胶上加一小块滤纸或一点吸水棉。根据样品量,将洗脱液的液位控制在一定的高度。


均质:搅拌成匀浆。加入两倍于干硅胶体积的溶剂,用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱液为石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系,则与石油醚混合;如果洗脱液为氯仿/乙醇体系,则与氯仿混合。如果不能搅拌成匀浆,说明溶剂中的水含量过高,特别是乙酸乙酯/丙酮。如果与水不相容要去除分配色谱,要事先用无水硫酸钠长期干燥。氯仿用无水氯化钙干燥以除去1%的酒精。如果样品对酸敏感,则不能使用氯仿系统通过色谱柱。


2.装载样品


将待分离样品溶于柱载时使用的少量洗脱液中,制备体积小、浓度高的样品溶液,并将样品溶液加入色谱柱硅胶表面。如果样品未溶解在柱载用的洗脱液中,则将样品溶解在挥发性溶剂中,加入适量硅胶(不超过柱中硅胶总量的1/10)并与之充分混合,除去溶剂,将与样品混合的硅胶均匀地添加到柱的顶部(始终保持一定液位的洗脱液),然后覆盖一层硅胶。


装样时注意沿柱内壁缓慢加入,始终保持硅胶上端面平整。进样量为硅胶的1/60~1/30。


三.洗脱


洗脱剂可通过薄层色谱法进行选择。薄层色谱时,Rf值为0.2~0.3的溶剂体系一般采用梯度洗脱。


首先,打开柱下端活塞,保持洗脱液流速为每秒1~2滴。在上端连续加入洗脱剂(加入速度可由分液漏斗控制,与下端流出速度相似)。如果单一溶剂的洗脱效果不好,可以用混合溶剂进行洗涤(一般不超过三种溶剂),通常采用梯度洗脱。洗脱液的洗脱能力由弱变强。


四.收集和处理


洗脱液以相等的比例收集,每个部分的量大约等于使用的硅胶的量。用薄层法对每种洗脱液进行定性检测,并将含有相同组分的洗脱液进行组合。经过浓缩和再结晶,通常可以得到单体组分。如果仍然是几个单体组分的混合物,则单体组分的结晶不易分离出来。需要进一步的色谱分析或通过其他方法进行分离。


注:(1)柱层析比薄层色谱具有更强的分离能力和更好的分离效果,特别是对于结构相似、性质相似、薄层色谱分离困难的组分。


(2)洗涤塔时,不要使用含水的混合溶剂。

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